Reagenzkit / als Lösung 2-D Quant

Farbstofffür Elektrophoresefür Proteinkonzentration

2-D Quant Kit ist für die genaue Bestimmung der Proteinkonzentration in Proben bestimmt, die für Elektrophorese-Techniken wie 2-D-Elektrophorese, SDS-PAGE oder IEF vorbereitet wurden. Bestimmt genau die Proteinkonzentration in Gegenwart von 2% SDS, 1% DTT, 8 M Harnstoff, 2 M Thioharnstoff, 4% CHAPS, 2% Pharmalyte und 2% IPG-Puffer. Fällt Proteine quantitativ aus und lässt dabei störende Substanzen zurück. Lineare Reaktion im Bereich von 0 bis 50 μg Protein, mit empfohlenen Probenvolumina von 1 bis 50 μl. Gängige spektrophotometrische Methoden zur Quantifizierung von Proteinen beruhen entweder auf der Bindung von Coomassie-Farbstoffen oder der durch Proteine katalysierten Reduktion von Kupfer(Cu2+)-Ionen zu Kupfer(Cu+)-Ionen. Farbstoffbindende Assays können nicht in Gegenwart von Reagenzien verwendet werden, die ebenfalls den Farbstoff binden. Dazu gehören Trägerampholyte und Detergenzien wie PlusOne CHAPS, SDS und Triton X-100. Assays, die von der Reduktion von Kupfer(II)-Ionen abhängen, können nicht in Gegenwart von Reduktionsmitteln wie DTT oder in Gegenwart von Reagenzien, die mit Kupfer(II)-Ionen Komplexe bilden, wie Thioharnstoff oder EDTA, verwendet werden. Das Verfahren des 2-D Quant Kits funktioniert durch die quantitative Ausfällung von Proteinen, während störende Substanzen zurückbleiben. Der Assay basiert auf der spezifischen Bindung von Kupferionen an Proteine. Die ausgefällten Proteine werden in einer kupferhaltigen Lösung resuspendiert und das ungebundene Kupfer wird mit einem kolorimetrischen Mittel gemessen. Die Absorption bei 480 nm steht in umgekehrter Beziehung zur Proteinkonzentration.