Mycoplasma-Detektion-Reagenz MB000-1591

monoklonaler AntikörperEnzymeantibiotisch

Mykoplasmen: Auch bekannt als Mykoplasma, der kleinste und einfachste prokaryotische Organismus, der je entdeckt wurde. Schätzungsweise 15 bis 35 % der Zellen sind mit Mykoplasmen kontaminiert. Eine Kontamination mit Mykoplasmen kann viele Auswirkungen auf die Zellen haben, einschließlich der metabolischen, immunologischen oder biochemischen Eigenschaften, des Wachstumsstatus und des Überlebens der Zellen, was sich auf die Stabilität, die Zuverlässigkeit und die Genauigkeit der Versuchsergebnisse auswirkt; Mykoplasmen sind schwer nachweisbar und schwer zu eliminieren, sie können den 0,22μm-Standardfilter leicht passieren, und sie können auch den meisten Antibiotika entgegenwirken, was große Verluste in der Zellkultur verursacht. Daher müssen die Zellen regelmäßig (z. B. alle 2 bis 3 Monate) auf eine Mykoplasmen-Kontamination untersucht werden. Für den Nachweis von Mykoplasmen stehen eine Reihe von Methoden zur Verfügung, darunter Brühe- oder Agarkultur, direkte oder indirekte Fluoreszenzfärbung, ELISA, direkte oder indirekte PCR usw., wobei die direkte PCR sehr empfindlich ist. Um die Genauigkeit der PCR-Ergebnisse zu gewährleisten und eine unspezifische PCR-Amplifikation und Kontamination zu verhindern, werden üblicherweise das Hot-Start-Taq-Enzym und UDG (Uracil-DNA-Glycosylase) verwendet. Das aktive Zentrum des chemisch modifizierten Taq-Enzyms ist blockiert, so dass das Enzym bei niedrigen oder normalen Temperaturen nicht aktiv ist, so dass eine unspezifische Amplifikation aufgrund von Fehlanpassungen der Primer vor dem Laden zur PCR-Amplifikation nicht stattfindet. Bei hohen Temperaturen (z. B. 95 °C) werden die chemisch modifizierten Gruppen hydrolysiert und alle Enzymaktivitäten freigesetzt, wodurch der Heißstart des Taq-Enzyms erreicht wird. Minimierung der unspezifischen Amplifikation und der Primer-Dimer-Bildung sowie Erhöhung der Amplifikationsempfindlichkeit und -spezifität.