Dieser ELISA-Kit verwendet das Sandwich-ELISA-Prinzip. Die in diesem Kit enthaltene Mikro-ELISA-Platte ist mit einem spezifischen Antikörper gegen Human EGF vorbeschichtet. Standardlösungen oder Proben werden in die Vertiefungen der Mikro-ELISA-Platte gegeben und mit dem spezifischen Antikörper kombiniert. Dann werden ein biotinylierter Nachweisantikörper, der spezifisch für Human EGF ist, und ein Avidin-Meerrettich-Peroxidase (HRP)-Konjugat nacheinander in jede Vertiefung der Mikroplatte gegeben und inkubiert. Freie Bestandteile werden abgewaschen. Die Substratlösung wird in jede Vertiefung gegeben. Nur die Vertiefungen, die Human EGF, den biotinylierten Detektionsantikörper und das Avidin-HRP-Konjugat enthalten, erscheinen in blauer Farbe. Die Enzym-Substrat-Reaktion wird durch Zugabe von Stopplösung beendet und die Farbe färbt sich gelb. Die optische Dichte (OD) wird spektrophotometrisch bei einer Wellenlänge von 450 nm ± 2 nm gemessen. Der OD-Wert ist proportional zur Konzentration von Human EGF. Sie können die Konzentration von Human EGF in den Proben berechnen, indem Sie die OD der Proben mit der Standardkurve vergleichen.
Technische Daten
Da die OD-Werte der Standardkurve je nach den Bedingungen der tatsächlichen Testdurchführung (z. B. Bediener, Pipettiertechnik, Waschtechnik oder Temperatureffekte) variieren können, sollte der Bediener für jeden Test eine Standardkurve erstellen. Typische Standardkurven und Daten werden im Folgenden nur als Referenz angegeben.
Genauigkeit
Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays): 3 Proben mit niedrigem, mittlerem und hohem Gehalt wurden jeweils 20 Mal auf einer Platte getestet.
Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays): 3 Proben mit niedrigem, mittlerem und hohem Gehalt wurden auf 3 verschiedenen Platten getestet, jeweils 20 Wiederholungen auf jeder Platte.
---