Dieser ELISA-Kit verwendet das Sandwich-ELISA-Prinzip. Die in diesem Kit enthaltene Mikro-ELISA-Platte ist mit einem spezifischen Antikörper gegen humanes TNF-α vorbeschichtet. Standardlösungen oder Proben werden in die Vertiefungen der Mikro-ELISA-Platte gegeben und mit dem spezifischen Antikörper kombiniert. Anschließend werden ein biotinylierter Nachweisantikörper, der spezifisch für Human TNF-α ist, und ein Avidin-Meerrettichperoxidase (HRP)-Konjugat nacheinander in jede Vertiefung der Mikrotiterplatte gegeben und inkubiert. Freie Bestandteile werden abgewaschen. Die Substratlösung wird in jede Vertiefung gegeben. Nur die Vertiefungen, die humanes TNF-α, den biotinylierten Detektionsantikörper und das Avidin-HRP-Konjugat enthalten, erscheinen blau gefärbt. Die Enzym-Substrat-Reaktion wird durch Zugabe von Stopplösung beendet und die Farbe färbt sich gelb. Die optische Dichte (OD) wird spektrophotometrisch bei einer Wellenlänge von 450 nm ± 2 nm gemessen. Der OD-Wert ist proportional zur Konzentration von Human TNF-α. Sie können die Konzentration von Human-TNF-α in den Proben berechnen, indem Sie die OD der Proben mit der Standardkurve vergleichen.
Technische Daten
Da die OD-Werte der Standardkurve je nach den Bedingungen der tatsächlichen Testdurchführung (z. B. Bediener, Pipettiertechnik, Waschtechnik oder Temperatureffekte) variieren können, sollte der Bediener für jeden Test eine Standardkurve erstellen. Nachstehend finden Sie eine typische Standardkurve und Daten als Referenz.
Genauigkeit
Intra-Assay-Präzision (Präzision innerhalb eines Assays): 3 Proben mit niedrigem, mittlerem und hohem Gehalt wurden jeweils 20 Mal auf einer Platte getestet.
Inter-Assay-Präzision (Präzision zwischen Assays): 3 Proben mit niedrigem, mittlerem und hohem Gehalt wurden auf 3 verschiedenen Platten getestet, jeweils 20 Wiederholungen auf jeder Platte.
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