Reagenzkit / umgekehrte Transkriptase RScript™

Farbstofffür cDNA-Synthese

Dieses Kit wurde auf der Grundlage der reversen Transkriptase RScript II entwickelt, die einen Primer für die reverse Transkription mit einer Stammschleifenstruktur verwendet, der an das 3'-Ende des miRNA-Moleküls bindet. Unter der Wirkung der RScript II Reverse Transkriptase wird die künstlich verlängerte miRNA-Erststrang-cDNA gewonnen. Die empfohlene allgemeine Stem-Loop-Sequenz ist 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'; andere Stem-Loop-Sequenzen können je nach experimentellem Bedarf ebenfalls ausgewählt werden. In der Regel müssen die Primer für die reverse Transkription nur 6 inverse, komplementäre Basen am 3'-Ende der miRNA an die Stem-Loop-Sequenz anhängen. Diese Methode ist hochspezifisch und führt die reverse Transkription nur für die reifen miRNAs durch, ohne dass ihre Vorläufer sie beeinträchtigen. Die miRNAs mit sehr homologen Sequenzen können genau unterschieden werden. Die mit diesem Produkt gewonnenen Produkte der reversen Transkription können direkt für den anschließenden quantitativen Nachweis durch Farbstoff- oder Sondenmethoden verwendet werden. Empfindlichkeitstest von RK004-0050 RK004-0050 wurde mit verschiedenen Konzentrationen (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng) von Hela-Zell-RNA als Vorlage getestet, die auf das has-mir16-5p-Gen abzielt. Die Amplifikationskurven zeigten eine Empfindlichkeit von nur 10 pg Gesamt-RNA Amplifikationsleistung von RK004-0050 mit Templates aus verschiedenen Quellen (A) Hela-Zell-RNA (B) Maus-RNA RK004-0050 wurde mit verschiedenen Konzentrationen (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng) von Hela-Zell-RNA und Maus-RNA als Templates verwendet. Die Amplifikationskurven für verschiedene miRNAs zeigten eine ausgezeichnete Leistung für Human-U6, has-mir16-5p, has-mir221-3p, Mouse-U6, mmu-mir-5p, mmu-mir24-3p und andere.