Testkit für Forschungszwecke HTRF

IFN-βfür ZellenSerum

Das HTRF Human IFN-β Detection Kit ist ein Immunoassay für den Nachweis und die Quantifizierung von Human IFN-β in Zellüberständen in einem homogenen Format (keine Waschschritte, keine Trennschritte). Überblick Interferone vom Typ I, Interferon alpha (IFN-α) und Interferon beta (IFN-β), spielen eine wesentliche Rolle bei der angeborenen Immunantwort auf virale Infektionen. IFN-β wird von Fibroblasten, Makrophagen und dendritischen Zellen sowie endolialen Zellen produziert. Die Expression des IFN-β-Gens wird durch Transkriptionsfaktoren wie IRF-3, c-Jun/ATF-2 und NF-kappaB gesteuert, die den Mustererkennungsrezeptoren, wie z. B. den Toll-like-Rezeptoren, nachgeschaltet sind. Insbesondere IFN-β ist der primäre funktionelle Indikator für die Aktivierung des cGas-cGAMP-STING-Wegs. Sobald IFN-β sezerniert wird, bindet und aktiviert es den IFNAR1/IFNAR2-Rezeptorkomplex, der auf STAT1/2-Transkriptionsfaktoren angewiesen ist. Phosphorylierter STAT1/2 führt zur Induktion der antiviralen Genexpression. Die Bewertung von Serumproben erfordert häufig eine erhöhte Empfindlichkeit. In einigen Fällen können AlphaLISA-Assays eine ausreichende Empfindlichkeit aufweisen, um den Nachweis geringer Mengen von Analyten im Serum oder Plasma zu ermöglichen. Assay-Prinzip Der Zellüberstand, die Probe oder der Standard werden direkt in die Assay-Platte gegeben und mit HTRF®-Reagenzien detektiert (weiße Low-Volume-Platte mit 384 Kavitäten oder Revvity Low-Volume-Platte mit 96 Kavitäten in 20 µL). Die mit dem HTRF-Donor und -Akzeptor markierten Antikörper werden vorgemischt und in einem einzigen Dispensierschritt zugegeben, um das Assayverfahren weiter zu rationalisieren. Der Assay kann bis zu einem Format von 1536 Vertiefungen durchgeführt werden, indem die Größe der einzelnen Zugabevolumina einfach proportional angepasst wird. Analyse der Assay-Daten Die logistische 4-Parameter-Kurve (4PL) wird in der Regel für die Anpassung einer ELISA-Standardkurve empfohlen.