Cholinesterase (CHE) katalysiert die Hydrolyse des Substrats Butyrylthiocholin und bildet Butyrat und Thiocholin. Letzteres reduziert 5,5'-Mercaptobis-2-nitrobenzoesäure (DMNB) zu 5-Mercapto-2-nitrobenzoat (5-MNBA), einer farbigen Verbindung. Die Reaktion wird kinetisch bei 405 nm anhand der Geschwindigkeit der Gelbfärbung überwacht, die proportional zur CHE-Aktivität in der Probe ist.
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