Cholinesterase (CHE) katalysiert die Hydrolyse von Butyrylthiocholinsubstrat und bildet Butyrat und Thiocholin. Letzteres reduziert 5,5'-Mercaptobis-2-nitrobenzoesäure (DMNB) zu 5-Mercapto-2-nitrobenzoat (5-MNBA), einer farbigen Verbindung.
Die Reaktion wird kinetisch bei 405 nm durch die Geschwindigkeit der Bildung der gelben Farbe überwacht, die proportional zur Aktivität des CHE in der Probe ist.
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