Die Methode basiert auf der Segmentierung des spezifischen chromogenen Substrats 1,2-O-Dilauryl-rac-glycero-3-glutaric-(6'methyl-resorufin)-ester, das in stabilisierenden Mikropartikeln emulgiert ist. In Gegenwart spezifischer Pankreaslipase-Aktivatoren wie Colipase, Calciumionen und Gallensäuren wird das Substrat in 1,2-O-Dilauryl-rac-Glycerin und Glutarsäure-6′-methylresorufinester umgewandelt, der sich spontan in Glutarsäure und Methylresorufin zersetzt. Die Intensität der gebildeten Farbe ist proportional zur Konzentration der Lipase in der Probe.
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