Kaliumferrocyanid ist für die Färbung von Hämosiderin und die Unterscheidung von Hämosiderin von anderen Pigmenten bestimmt.
Das Prinzip:
Das Eisen aus dem Gewebe (im eisenhaltigen Zustand) kann mit verdünnter Salzsäure aus dem Eiweiß gelöst werden. Es reagiert dann mit Kaliumferrocyanid unter Bildung von blauem Eisen(III)-ferrocyanid, was als Preußischblaue Reaktion bekannt ist.
Methoden:
1. Gewebe in 10 % neutralem Pufferformaldehyd fixieren. Auf übliche Weise dehydrieren und einbetten.
2. Gewebe in destilliertem Wasser entparaffinieren. Ein weiteres Mal mit destilliertem Wasser abspülen.
3. Mischen Sie ein gleiches Volumen von 2 % Kaliumferrocyanid und 2 % Salzsäure. Die Mischung 20-30 Minuten lang auf die Objektträger tropfen. Mit destilliertem Wasser abspülen.
4. Gegenfärbung in Nuclear Fast Red Lösung für 5-10 Minuten und kurzes Abspülen mit destilliertem Wasser.
5. In 95%igem Ethanol und absolutem Ethanol dehydrieren, in Xylol klären und mit Einbettungsmaterial montieren.
Vorsichtsmaßnahmen:
1. Das Gewebe sollte mit neutral gepuffertem Formaldehyd fixiert werden. Wenn gewöhnliches Formaldehyd verwendet wird, sollte das Gewebe vor dem Einbetten kürzer fixiert werden. Gewebe, die über längere Zeit in gewöhnlichem Formaldehyd fixiert werden, reagieren schlecht. Vermeiden Sie die Verwendung von chromathaltigen Fixiermitteln.
2. Salzsäure analytischer oder besserer Qualität ist vorzuziehen, da Salzsäure minderer Qualität in der Regel Eisenverunreinigungen enthält, die zu falsch positiven Ergebnissen führen können.
3. Alle während des gesamten Verfahrens verwendeten Behälter und Utensilien sollten sauber sein. Die Verwendung von Eisenwerkzeugen ist zu vermeiden.
4. Bei den Schritten vor der Eisenreaktion nur mit destilliertem Wasser spülen, um zu verhindern, dass sich das Eisen im Leitungswasser mit dem Kalziumsalz im Gewebe verbindet und zu einem falsch positiven Ergebnis führt.
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