Diagnose-Testkit cobas®

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Übersicht
cobas® Respiratory flex ist ein automatisierter, multiplexer, qualitativer Nukleinsäuretest für die Verwendung auf den Systemen cobas® 5800/6800/8800. Er nutzt Echtzeit-PCR und Roches TAGS-Technologie (Temperature Activated Generation of Signal), um die gleichzeitige Erkennung und Differenzierung mehrerer respiratorischer Virusziele in einem einzigen Brunnen zu ermöglichen. Der Assay liefert bis zu 12 virale Ergebnisse plus eine RNA-Interne Kontrolle pro Brunnen und ist für die in-vitro-diagnostische Verwendung (IVD) an nasopharyngealen Abstrichproben von Personen mit Anzeichen und Symptomen einer Atemwegsinfektion in Verbindung mit klinischen und epidemiologischen Risikofaktoren vorgesehen.

Zweckbestimmung / Klinische Anwendung
Qualitative Erkennung und Differenzierung respiratorischer viraler Nukleinsäuren zur Unterstützung der Diagnosestellung einer Atemwegsinfektion, wenn er zusammen mit klinischen und epidemiologischen Informationen verwendet wird. Negative Ergebnisse schließen eine Infektion nicht aus; positive Ergebnisse schließen eine Koinfektion nicht aus und geben möglicherweise nicht die endgültige Krankheitsursache an. Aufgrund genetischer Ähnlichkeit zwischen humanem Rhinovirus und Enterovirus kann der Assay diese nicht zuverlässig unterscheiden.

Wesentliche Merkmale und Ablauf

• Vollautomatisierte Probenaufbereitung (Nukleinsäureextraktion und -reinigung) gefolgt von PCR-Amplifikation und Detektion auf cobas® 5800/6800/8800 Systemen.
• Gleichzeitige Extraktion von Nukleinsäure und RNA-Interner Kontrolle (RNA IC); Nukleinsäure wird durch Proteinase und Lyse-Reagenz freigesetzt, an magnetische Glaspartikel gebunden, gewaschen und eluieret.
• Die TAGS-Technologie ermöglicht die Differenzierung mehrerer Ziele pro Fluoreszenzkanal durch Kombination von 5 Fluoreszenzkanälen mit 3 thermischen Detektionskanälen (T1, T2, T3), was in zukünftigen Implementierungen die Erkennung/Differenzierung von bis zu 15 Zielen pro Brunnen und mit diesem Kit bis zu 12 respiratorischen Virusergebnissen plus RNA IC erlaubt.
• Der Mastermix enthält eine thermostabile DNA-Polymerase, TAGS-Sonden und dUTP sowie AmpErase (Uracil-N-Glycosylase) zur Kontrolle von Carryover-Kontaminationen.

Zielpanel (Ziel — Zielgen)
Ziel — Zielgen
Influenza A — Matrix protein 1 (M1)
Influenza B — Non-structural protein NS-1/2 (NS1/NEP)
Respiratory Syncytial Virus (RSV) — Matrix protein (M)
SARS-CoV-2 — ORF1ab polyprotein and ORF1a polyprotein (ORF1ab / ORF1a)
Adenovirus (Arten B, E) — Terminal protein precursor (E2B)
Adenovirus (Art C) — Capsid protein precursor (L3)
Human Metapneumovirus — Matrix protein (M)
Enterovirus / Rhinovirus — 5' untranslated region (5'UTR)
Coronavirus OC43 — Replicase polyprotein 1a/1b (ORF1ab)
Coronavirus HKU1 — Replicase polyprotein 1a/1b (ORF1ab)
Coronavirus 229E — Replicase polyprotein 1a/1b (ORF1ab)
Coronavirus NL63 — Replicase polyprotein 1a/1b (ORF1ab)
Human Parainfluenza Virus 1 — L polymerase protein (L)
Human Parainfluenza Virus 2 — Large protein (L)
Human Parainfluenza Virus 3 — Nucleocapsid protein (N)
Human Parainfluenza Virus 4 — Large protein (L)

Analytische / operative Hinweise

• Verwendet ziel-spezifische Vorwärts-/Rückwärts-Primer und fluoreszenzmarkierte Sonden; das TAGS-Sondensignal erfordert Nuklease-Spaltung plus eine Erhöhung der Reaktionstemperatur zur Aktivierung der Fluoreszenz.
• Fluoreszenz wird über mehrere Kanäle und bei drei definierten Temperaturen pro Zyklus erfasst, um die Multiplex-Differenzierung zu ermöglichen.
• Externe positive und negative Kontrollen werden ebenso wie Patientenproben verarbeitet.

Einschränkungen

• Negative Ergebnisse schließen eine Atemwegsinfektion nicht aus und sollten nicht als alleinige Grundlage für die Patientenversorgung verwendet werden.
• Positive Ergebnisse schließen Koinfektionen nicht aus und der detektierte Erreger ist möglicherweise nicht die definitive Ursache der Erkrankung.
• Kann humanes Rhinovirus und Enterovirus aufgrund genetischer Ähnlichkeit nicht zuverlässig unterscheiden.

Vorteile / Highlights

• Flexibilität bei der Auswahl von Zielen und Möglichkeit, zusätzliche Ergebnisse (digital reflex) aus demselben Kit/Lauf zu erhalten.
• Ermöglicht die Konsolidierung mehrerer respiratorischer Ziele in einer anpassbaren Lösung auf bestehenden cobas® x800 Systemen ohne Hardware- oder Software-Updates.
• Entwickelt, um die Laborlogistik zu vereinfachen, Doppeltests zu reduzieren und eine effiziente PCR-Diagnostik mit kurzer Turnaround-Zeit zu unterstützen.

Eigenschaften / Technische Spezifikationen

• Ziele: Influenza A, Influenza B, RSV, SARS-CoV-2, Adenovirus (B, C, E), Human Metapneumovirus, Enterovirus/Rhinovirus, häufige humane Coronaviren (229E, HKU1, NL63, OC43), Parainfluenza-Viren 1–4.
• Probenart: Nasopharyngeale Abstrichproben, gesammelt in Copan UTM-RT® oder BD™ Universal Viral Transport (UVT) oder Äquivalent.
• Mindestprobenvolumen: 0,4 mL.
• Technologie: Echtzeit-PCR mit Roche TAGS (Temperature Activated Generation of Signal) Multiplexing.
• Kit-Größe: 192 Tests pro Kit.
• Stabilität nach Öffnung des Kits: 90 Tage mit 40 Wiederverwendungen.
• Interne Kontrolle: RNA-Interne Kontrolle enthalten und ko-extrahiert.