Reagenzkit für Proben KAPA RNA EvoPrep

DNA-PolymeraseLigase ADNfür Forschungszwecke

Übersicht
Die KAPA RNA EvoPrep Kits bieten einen schlanken Workflow zur RNA-Bibliotheksvorbereitung für Next-Generation Sequencing (NGS). Aufbauend auf den KAPA RNA HyperPrep Kits wandeln die EvoPrep Kits Eingangs-RNA in adaptor-vermischte Bibliotheken um, die bereit für das Sequencing sind, bei weniger Schritten und reduziertem Hands-on-Aufwand. Produkt nur für Forschungszwecke (RUO), nicht für diagnostische Verfahren.

KAPA RNA EvoPrep Kit für RNA-Bibliotheksvorbereitung

• Schneller Workflow von ca. 3,5 Stunden mit minimaler Hands-on-Zeit
• Empfindlich: erkennt mehr einzigartige Transkripte, auch bei niedrigen Inputs und degradiertem (FFPE) RNA
• Zuverlässig: hohe Übereinstimmung über verschiedene Eingabemengen und reproduzierbare Ergebnisse

Wesentliche Vorteile und Highlights

• Vereinfachter Workflow reduziert Hands-on-Zeit, Reagenzienverbrauch und Kunststoffbedarf
• Verbesserte Bibliothekskonversionsraten und höhere Ausbeuten über einen weiten Eingabebereich
• Erhöhte Erfassung einzigartiger Moleküle (verbesserte gemappte Einzigartigrate, geringere Duplikation und niedrigere Adapter-Dimer-Anteile)
• Automationsfreundlich: kompatibel mit Liquid-Handling-Automation und Roche AVENIO Edge System Workflows
• Enthält verbesserte Ligation-Chemie (KAPA EvoT4 DNA ligase) und KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase im Amplifikationsmix für niedriges Bias und hohe PCR-Fidelity

Leistung und Sensitivität
Die Kits zeigen eine verbesserte Leistung im Vergleich zu früheren KAPA RNA HyperPrep Kits und mehreren Konkurrenz-Kits: erkennen mehr Gene und Transkripte bei minderwertigen FFPET-Inputs und bei niedrigen (5 ng) bis höheren Inputs (bis zu den empfohlenen Maxima). Die angegebenen Daten heben hervor: höhere Anzahl detektierter Gene in minderwertigen FFPET-Proben, höhere gemappte Einzigartigkeitsraten, verringerte Duplikationsraten und niedrigere Adapter-Dimer-Anteile.

Workflow-Zusammenfassung

• Optionale Voranreicherung: entweder mRNA-Capture (poly(A) Oligo-dT-Perlen) oder rRNA- und/oder Globin-Depletion (Hybridisierung mit komplementären DNA-Oligos gefolgt von RNase H/DNase-Behandlung)
• RNA-Fragmentierung (Wärme + Magnesium)
• 1. Strang cDNA-Synthese mittels random priming
• Kombinierte 2. Strang-Synthese und A-Tailing (dUTP in 2. Strang zur Strangspezifizität)
• Adapter-Ligation (TA-Ligation an A-getailte Fragmente)
• Bibliotheksamplifikation mit hoch-fideler Polymerase (der mit dUTP markierte Strang wird nicht amplifiziert, um Strangspezifizität zu ermöglichen)

Kompatibilität und empfohlene Inputs
Tabelle (Produktvarianten und typische Inputs):
Product variant — Typical reactions — EAN
KAPA RNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336240564
KAPA RNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336240557
KAPA RNA EvoPrep Kit (384rxn) — 384 reactions — 07613336239308
KAPA mRNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336239377
KAPA mRNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336239384
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (24rxn) — 24 reactions — 07613336239315
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (96rxn) — 96 reactions — 07613336239322
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (384rxn) — 384 reactions — 07613336239339
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (96rxn) — 96 reactions — 07613336239353
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (384rxn) — 384 reactions — 07613336239360

Hinweise zu Inputs und Probentypen: empfohlene Eingabebereiche variieren je nach Kit-Variante (Beispiele umfassen Bereiche wie 0,25 ng–100 ng für bestimmte RNA EvoPrep Kits, 5 ng–1 µg oder 25 ng–1 µg für andere). KAPA mRNA EvoPrep ist für RNA hoher Qualität (RIN ≥ 7) und poly(A)-selektierte Workflows vorgesehen; Kits mit RiboErase (HMR) / Globin sind für Depletion in Mensch/Maus/Ratte vorgesehen und mit minderwertigem FFPE-RNA kompatibel, wenn sie mit geeigneten Inputs und Protokollanpassungen verwendet werden.

Lagerung und Handhabung
Typische Lagerhinweise: temperaturempfindliche Komponenten (cDNA-Synthese- und Bibliotheksvorbereitungs-Reagenzien) sollten bei –15°C bis –25°C gelagert werden; einige Komponenten der Voranreicherung (z. B. mRNA-Capture) bei 2°C–8°C; KAPA HyperPure Beads bei 2°C–8°C. Folgen Sie der Gebrauchsanweisung für genaue Lagerungs- und Handhabungsangaben sowie empfohlene sichere Haltepunkte im Protokoll.

Regulatorischer Hinweis / Verwendungshinweis
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische Verfahren geeignet.

Spezifikationen

• Produktfamilie: KAPA RNA EvoPrep
• Hauptanwendung: RNA-Bibliotheksvorbereitung für NGS (vollständiges Transkriptom, Genexpressionsanalyse, Spleißstellen, Genfusionen, lncRNA)
• Enrichtungsoptionen: keine Anreicherung (Total-RNA), mRNA-Capture (poly(A)), rRNA- und/oder Globin-Depletion (HMR/Globin)
• Input-Bereiche (Beispiele pro Kit): 0,25 ng–100 ng; 5 ng–1 µg; 25 ng–1 µg (abhängig von der Kit-Variante)
• Bibliotheksvorbereitungszeit (typisch): ~3,5 Stunden (verschlanktes Protokoll)
• Fragmentierung: Wärme + Magnesium, anpassbar an Input-Qualität
• Strangspezifität: Ja (dUTP-Inkorporation im 2. Strang; strangspezifisches Sequencing)
• Ligation-Chemie: KAPA EvoT4 DNA ligase
• Amplifikationspolymerase: KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase
• Beads-Cleanup: KAPA HyperPure Beads werden für Reinigungs-Schritte geliefert
• Automatisierung: Kompatibel mit Liquid-Handling-Automation und Roche AVENIO Edge System
• Arten-Kompatibilität: KAPA RNA EvoPrep (ohne Voranreicherung) — breit (Eukaryoten, Mikroben, Pflanzen etc.); Kits mit RiboErase (HMR)/Globin — Depletion-Oligos für Mensch, Maus, Ratte
• Typische Vorteile: verbesserte Sensitivität (mehr einzigartige Transkripte), höhere gemappte Einzigartigkeitsraten, geringere Duplikation und Adapter-Dimer-Anteile, weniger Reagenzien/Reinigungen